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名方甘草(水炙)41.40 g

2 方法与结果

2.1 18批黄连汤物质基准对应实物的经典基准制备

对黄连汤煎煮工艺进行研究,确定最佳工艺为:称取黄连41.40 g,名方甘草(水炙)41.40 g,黄连干姜41.40 g,物质桂枝41.40 g,量值人参27.60 g,传递半夏(汤洗)60.00 g,分析大枣42.00 g于砂锅中,经典基准加2000 mL水,名方浸泡60分钟,黄连以武火(2200 W)煮沸后,物质调节火力至文火(900 W)保持微沸,量值煎煮约60分钟后,传递趁热过滤,分析滤液放凉后加水调整体积至1200 mL。经典基准根据最佳工艺进行3批验证实验,结果显示指标性成分黄连碱、巴马汀、小檗碱、甘草苷、甘草酸、6-姜辣素、桂皮醛平均含量分别为4.52、5.83、15.84、1.70、2.95、1.28、1.39 mg·g-1,RSD分别为0.72%、0.74%、0.71%、0.86%、1.6%、1.3%、0.65%,说明黄连汤工艺稳定。

采用随机数表法,对各药味饮片批次进行随机组合及排序,见表2。按照最佳工艺制备18批黄连汤物质基准对应实物,编号为HLD1~HLD18。

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2.2 黄连汤物质基准特征图谱方法的建立

2.2.1色谱条件

色谱柱:Merck Purospher Star LP RP-18 endcapped色谱柱(250 mm× 4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)-水(含0.05mol·L-1磷酸二氢钾,磷酸调节pH为3.0,B);梯度洗脱(0~7 min,10%~22% A;7~19 min,22%~23.5% A;19~28 min,23.5%~24% A;28~42 min,24%~35% A;42~52 min,35%~63% A;52~54 min,63%~10% A;54~56 min,10% A),流速:1 mL·min-1,检测波长:280 nm,柱温:25 ℃,进样体积:10 μL。特征图谱见图1。

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5.甘草苷;10.黄连碱;11.巴马汀;12.小檗碱;14.桂皮醛;15.甘草酸;17.6-姜辣素

对黄连汤物质基准特征图谱进行特征峰归属,共归属17个特征峰,经对照品指认7个特征峰信息。其中1,2,3,6,7,8,9,10(黄连碱),11(巴马汀),12(小檗碱)号峰来源于黄连;4,5(甘草苷),15号峰(甘草酸)来源于甘草;13,14(桂皮醛),16号峰来源于桂枝;17号峰(6-姜辣素)来源于干姜;人参、半夏、大枣在此条件下没有色谱信息,后续将进行进一步研究。

2.2.2供试品溶液的制备

精密量取黄连汤物质基准对应实物2 ml至10 ml量瓶中,加入甲醇7 mL,再加水至刻度,使甲醇浓度为70%,称定重量,超声30分钟,放冷,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。同法制成各单味药、各阴性供试品溶液。

2.2.3 精密度考察

取同一供试品溶液,按2.2.1项下色谱条件,连续进样6次。以小檗碱为参照峰,计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD,结果各共有峰相对保留时间RSD<0.39%,相对峰面积RSD<2.8%,表明仪器精密度良好。

2.2.4 重复性考察

取同一份黄连汤物质基准对应实物,按2.2.2项下平行制备6份供试品溶液,按2.2.1项下色谱条件进样。以小檗碱为参照峰,计算各共有峰相对保留时间和相对峰面积RSD,结果各共有峰相对保留时间RSD<0.65%,相对峰面积<2.8%,表明方法重复性良好。

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